Rossolis

Posté le: 20.01.2007, 02:19:18

Bonjour,

J'aurai une question et tout particulièrement pour M. Fabrice Buxerolles. Celà fait plusieurs mois maintenant que je me suis mis à la culture in vitro et malheuresement je reste bloqué dans mes expériences à cause de la stérilité (coulage de milieu hormoné dans des boite de pétri, etc...). C'est là que j'ai vu, en cherchant sur internet, que le président de la cellule in vitro "a conçu sa hotte avec un système de filtration". J'aimerai juste savoir où il a trouvé son système de filtration car après même plusieurs heures de recherche sur internet, je n'ai trouvé que des énormes hottes de laboratoires qui coûtent plus de 3000 euros Shocked

.

Posté le: 17.03.2007, 18:40:01

En fait c'est bon, je m'en suis fabriqué une...

Posté le: 17.03.2007, 22:13:27

Salut Zendair,

Désolé que Bux ne t'ai pas donné de tuyau pour trouver ton filtre HEPA mais il faut quand même noter que on trouve très facilement les informations utiles à la constructions de hottes stériles et ce dans le moindre détail (plans, choix des matériaux et accessoires) à partir de www.google.fr. Il est malheureusement très débordé en ce moment et ça fait des mois qu'il n'interviens plus sur le Forum.

Note quand même que un montage perso reste un bricolage. Les résultats sont nettement améliorés mais tu ne bosses pas dans un labo qui lui aussi devrait être quasi stérilisé (air conditionné et régulé etc ...).

Bonne chance pour les mises en bouteille Wink

A+

Posté le: 18.03.2007, 14:33:58

Salut,

Merci pour la réponse. En fait je me suis beaucoup inspiré de sa hotte, et en cherchant bien j'avais trouvé les filtres hépa sur le net. J'ai d'ailleurs poster un topic à ce sujet sur le forum carnivore avec des photos.
J'ai d'ailleurs été très surpris par les bons résultats que j'ai obtenu avec un tel montage.
En ce qui me concerne, ça m'interresserai beaucoup de participer à votre cellule in vitro pour un peu mieux connaitre les milieux de cultures et les techniques que vous utilisez et pourquoi pas faire aussi des essais de nouveaux milieux, ajouter d'hormones, autres techniques de stérilisations, etc... En fait, je fais ça en cours et j'ai réussi à obtenir une quantité impressionante de produit nécéssaire à la réalisation d'un milieu, ce qui me laisse beaucoup de possibilité pour faire des tests.

@++

Posté le: 18.03.2007, 18:11:13

J'ai eu Bux au téléphone hier un peu pour autre chose mais je lui ai touché un mot sur cette hotte stérile car ce n'est pas la première fois que le problème de la construction et du choix des matériaux se pose. On a décidé que nous allons faire un petit article, cela pourra aider ceux qui comme toi veulent se mettre à la création d'ine hotte stérile à moindre coût.

En ce qui concerne les milieux je n'ai pour ma part que travaillé avec des milieux tout fait. Il y en a plusieurs différents que l'on trouve facilement à partir du net. Les résultats sont il est vrai assez variables mais il est important de noter que tout le cycle de préparation des milieux et notamment la quantité et qualité d'eau utilisée est primordiale pour la réussite. Les succes et échecs sur ces milieux sont 9 fois sur 10 dus à un non respect de la bonne quantité d'eau, d'une eau impure ou avec un PH merdique, d'un PH final du milieu non contrôlé et non ajusté, assèchement des milieux suite à la cuisson, etc ...
Pour pratiquer l'invitro en amateur quelques accessoires sont quasi indispensables comme le PH mètre, de quoi mesurer les volumes de façon très précise, un osmoseur pour se faire une eau la plus pure possible (l'eau déminéralisée c'est de la merde, je me suis déjà cassé les dents dessus).

Bux en revanche fait ses milieux de A à Z, mais les moyens à mettre en oeuvre, produits (nombreux et cher), outillages comme la balance, sont alors très couteux. Essaie de prendre contact avec lui par MP, mais il n'y a pas de miracles, ses mélanges sont tous inspirés de la littérature et c'est les livres spécialisés qu'il faut se procurer pour maitriser la réalisation de mélanges homogènes et efficaces. Inutile de vouloir réinventer la poudre, elle existe déjà depuis longtemps Wink

Il suffit ensuite de moduler quelques concentrations de composants (il est précisé lesquels dans le bouquins) pour obtenir de légères améliorations sur les résultats. Il n'y a par contre pas de règles car même dans une même espèce cela change parfois d'une variété à une autre.

Perso je déconseille de réaliser les milieux soit-même à moins d'avoir une expérience certaine dans ces manipulations. Il y a des produits qui sont toxiques voir dangereux notament au niveau des hormones.
L'invitro ce n'est pas un jeu pour les enfants et c'est une activité qui se pratique avec un respect des règles de sécurité.

Posté le: 19.03.2007, 11:31:02

Salut,

Ben en fait je fait ça toutes les semaines pendant toute l'année. Pour les milieux, je les fait moi-même avec des solutions mères recupérés en cours et pour la plupard des minéraux je les ai trouvé en pharmacie. Pour le pH j'utilise du papier -pH, c pas terrible mais j'ai tout de même obtenu de bons résultats avec quelques plantes (passiflore, kiwi, litchi, etc). J'ai aussi pu récupérer de la verrerie de chimie, donc j'arrive a avoir des volumes assez précis. Ce qui m'interresse c justement savoir ce qui a été déjà testé comme milieu, comme par exemple diminuer les macro-éléments ou micro-élément dans le milieu de culture. Ou par exemple ce qui a été déjà testé pour la stérilisation des graines de plantes carnivores car j'ai de gros souci sur ce point là. Peu de protocoles et de travaux ont déjà été fait et énoncés clairement sur les plantes carnivores. Et il reste beaucoup d'expérience à faire comme par exemple l'utilisation d'alcool iodé pour la stérilisation.

Sinon pour l'article, ça serai, je pense, très utile car on peut alors corriger les défauts des hottes fait maison en les comparants. Voilà une photos de ma hotte :

J'ai pas encore eu l'opportunité de bien la tester, j'ai réalisé 12 introductions de graines de dionée ce week-end, je vais voir ce que celà donne.

Posté le: 19.03.2007, 22:12:24

Très belle photo, je l'ai intégré directement dans le site car il est vrai que imageshack est très pratique mais les photos en tendance à disparaitre au bout d'un certain temps ce qui est domage.
Je suis soufflé par le montage. Il y a des fois je fais de sacrés bricolos mais alors toi tu bas tous les scores Laughing

On peut dire que yu as de la suite dans les idées et une imagination exceptionelle, c'est tout simplement génial Exclamation

Voici cependant quelques remarques :
- On ne vois pas de préfiltre, si t'es pas en labo avec air purifié c'est vivement conseillé
- Le coup de l'aspirateur c'est original mais est-il neuf ? Car sinon il y a de grandes chance que ça te pulse de l'air saturé en poussières !!! Ton filtre va être HS en moins de deux et tu as de gros risques de contaminations
- Le bois nu c'est pas forcément top pour la désinfection préalable nécessaire avant la mise en route de la hotte ... enfin c'est à voir comment le bois réagit avec le temps
- Une charnière n'est pas étanche : attention aux déperditions et perturbations générées au niveau du fux d'air à son niveau ! Ce n'est pas recommandé
- La taille du filtre ne m'a pas l'air adapté à la taille de ton caisson. Il faudrait quasi le double en sens longueur.

---> ce ne sont là que des suggestions, seuls tes essais confirmeront ou infirmeront ces différents points

Comme je disais plus haut contact Bux pour les mélange. Je sais qu'il avait démarré sur du MS, qu'il en a essayé d'autres et qu'il est revenu sur le MS.

Au niveau stérilisation si tu utilises des graines ne te fatigue pas avec produits divers. L'eau de javel dilué à 1/5 fait parfaitement l'affaire.
La clef c'est d'utiliser un mouillant si besoin et plusieurs rinçages en eau stérilisée (sous ta hotte bien évidemment). La durée de désinfection est variable fonction de l'état général des graines (contamination présumée), mais aussi de la taille et de l'épaisseur et nature de la couche protectrice.
De mémoire entre 1 et 5 minutes. C'est le rinçage qu'il ne faut pas ratter car au niveau désinfection tu ne peux pas faire mieux que l'eau de javel.

Posté le: 24.03.2007, 17:00:46

Merci pour tes suggestions et tes conseilles. Laughing

C'est vrai que pour le pré-filtre je n'y avait pas pensé, j'en ai rajouté un aujourd'hui Smile

. Sinon voilà un photo de la "hotte" à l'arrière.

C'est vraiment du bricolage à la MacGyver mais bon sa à l'air de marcher plutot bien. En fait j'ai fait 12 pots, dans chaque pot il y a 3 graine. J'ai fait 6 pots de Dionnée et 6 de Drosera rotondifolia. J'ai eu après une semaine 1 pot contaminé par une bactérie venant de l'atmosphère et 3 autres pots qui ont été contaminés par 1 graine de dionnée sur les 3 dans le pots. Il va falloir encore attendre 1-2 semaines pour pouvoir dire si ma hotte marche bien ou non. Pour l'instant 1pot/12 c plutot bien. Toutes les graines ont été stérilisé à l'alcool 70° sans détergent et sans rinçage.

Pour le bois je sais c'est pas terrible, si j'ai beaucoup de contamination je vais tenter de mettre des plaque en métal sur le bois.
Je reposterai les résultats la semaine prochaine.

Posté le: 24.03.2007, 22:18:28

Avec l'alcool 70° tu vas avoir très peu de chances de succès car il ne suffit pas à détruire les spores qui seraient éventuellement colées sur tes graines et qui sont la principale cause de contamination des milieux au bout de 8 à 15 jours. Désinfecte à l'eau de javel, je te dis Very Happy

L'important au niveau des paroies de ta hotte c'est qu'elles soient stérilisées avant les manipulations. Après il faut voir pour le bois car si sa structure est très poreuse, elle va emprisoner des spores qu'il ne sera pas possible de détruire lors du netoyage des paroies. Dans ce cas là un revêtement s'impose (cela pourait même être une peinture bien épaisse en plusieurs couches, inutile de trop se compliquer la vie)

Posté le: 16.04.2007, 11:10:39

Bonjour,

Ben voilà je voulais quand même vous informer sur les résultats obtenus. En fait il n'y a toujours pas eu plus de contaminations que les 4 pots déjà mentionnés Smile

. Je pense que maintenant il n'y en aura pas plus, sa fait quand même plus de 3 semaines que je les ai semé. Les graines de dionée commencent d'ailleurs à germer. Pour les graines de droseras : toujours rien Confused

J'dois avouer que je suis assez surpris par les résultats en sachant qu'il n'y a qu'une seule véritable contamination venant de la hotte (sur 12 pots) Surprised

.

Merci encore pour les conseilles.
a+

Posté le: 20.04.2007, 13:36:41

Félicitation pour ces résultats Very Happy

La contamination par bactéries c'est par contre au bout de 4 à 5 semaines. C'est une espèce de gelatine incolore qui envahie plus ou moins rapidement le milieu.

Il arrive aussi que la contamination se produise 2 semaines après la germination car si la graine a emprisoné des spores ce n'est que lors de la germination que cela peut se voir. C'est assez rare, mais cela arrive.

Comme je disais fais attention de ne pas avoir un vieillissement accéléré de ta hotte par un environnement insalubre.